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    大鼠胰島素受體α(ISR-α)試劑盒技術(shù)分析

    點擊次數(shù):1145  更新時間:2015-04-16

    大鼠胰島素受體α(ISR-α試劑盒技術(shù)分析

    實驗原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素受體ISR-α水平。用純化的大鼠胰島素受體α(ISR-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰島素受體α(ISR-α),再與HRP標記的胰島素受體α(ISR-α)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素受體α(ISR-α)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠胰島素受體α(ISR-α)濃度。

    試劑盒組成

    1

    30倍濃縮洗滌液

    20ml×1瓶

    7

    終止液

    6ml×1瓶

    2

    酶標試劑

    6ml×1瓶

    8

    標準品(160 IU/L)

    0.5ml×1瓶

    3

    酶標包被板

    12孔×8條

    9

    標準品稀釋液

    1.5ml×1瓶

    4

    樣品稀釋液

    6ml×1瓶

    10

    說明書

    1份

    5

    顯色劑A液

    6ml×1瓶

    11

    封板膜

    2張 

    6

    顯色劑B液

    6ml×1/瓶

    12

    密封袋

    1個

    標本要求

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融

    2.大鼠胰島素受體ISR-α不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步驟

    1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    80 IU/L

    5號標準品

    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

    40 IU/L

    4號標準品

    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

    20 IU/L

    3號標準品

    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

    10 IU/L

    2號標準品

    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

    5 IU/L

    1號標準品

    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

    2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

    4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7.         溫育:操作同3。

    8.         洗滌:操作同5。

    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

    11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    注意事項

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    8.大鼠胰島素受體ISR-α所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個月

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